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抗精子抗体的检测方法


  在进行抗精子抗体检测之前,有几个基本概念需要说明。

  (1)由于精子抗原的复杂性决定了相应抗体的多样性,试图用一种检测方法检出全部抗体是不可能的。

  (2)随着生殖生物学和免疫学的进步,新的检测方法不断创立,至目前为止,抗精子抗体检测方法已有 10多种,应根据临床或研究目的、抗原定位以及与不孕、不育的关系等进行选择。

  (3)目前,在众多检测方法中,没有一种是对不孕症完全特异的抗体检测法,因为与精子结合的抗体,不一定都能造成精子生物功能障碍。临床关注的是与不孕症呈因果关系的抗体。对这类抗体的检测,女方主要检查女性血清中与精子膜抗原发生反应的抗体,检测方法多用免疫珠法和 MAR 试验进行筛选,然后用精子制动化试验和体外受精阻断试验作进一步鉴定。男性方面,主要也是检查与精子膜抗原反应的抗体,除进行免疫珠检测、MAR 试验外,可以用凝集试验、制动化试验、受精阻断试验来确定抗体的生物学活动。

  (4)抗精子抗体检测法的分类,当前还没有统一,但分类的原则主要是根据抗体的生物活性;抗体与活精子膜抗原的结合性和与精子及其提取抗原的反应性。有人分为 2 类,亦有人分为 3类。在此,引述 1993年繁田实采用的分类表供参考(表 9-1)。

  表 9-1 抗精子抗体的检测方法

  A.与精子及其提取抗原反应的抗体检测法

  1.致敏血球凝集反应

  2.间接荧光抗体法

  3.放射性核素标记测定法

  4.酶联免疫吸附法

  B.与运动精子膜抗原结合的抗体检测法

  1.检测与抗原结合性的方法

  (1)免疫珠测定法

  (2)混合抗球蛋白反应试验(MAR)

  2.检测抗原结合性及抗体生物活性方法

  (1)精子凝集试验

  (2)精子制动化试验

  (3)受精阻断试验

  注:A 法以固定精子作抗原,适用于间接荧光法和 ELISA 法等。

  B 法以活精子膜糖蛋白作抗原,适用于与膜抗原反应的抗体检查。

  一、精子凝集试验

  精子凝集试验从最初由 Kibrik等(1952年)创立的白明胶内精子凝集试验开始连同其后的发展,一共有 4 种:① 明胶凝集试验(Kibrik,1952);② 试管玻片凝集试验(Franklin,Dukes,1964);③ 毛 细 管 凝 集 试 验(Shulman,Hekman,Pann,1971);④ 浅 盘 凝 集 试 验(Friberg,1974)。

  (一)明胶凝集试验(gelatin agglutination test,GAT)

  【准备】

  (1)配制 Baker液(Bakersolution)

  葡萄糖3.00gNa2HPO4·7H2O0.46g

  NaCl0.20gKH2PO40.01g

  加双蒸水至 100mL。

  (2)用 Baker液配制 10% 白明胶溶液,并置 37℃ 水浴中备用。

  (3)精子悬浮液:取正常新鲜精液(精子密度为 80×106/mL 左右,活动率

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